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實時熒光定量 PCR技術

實時熒光定量PCR，簡稱RT-QPCR,屬于Q-PCR的一種，目前該技術已得到廣泛應用，如：擴增特異性分析、基因定量分析、基因分型、SNP分析等。熒光定量PCR常用的方法是DNA結合染料SYBRGreenⅠ的非特異性方法和Taqman水解探針的特異性方法。SYBRGreenI是一種結合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有綠色激發(fā)波長的熒光染料，可與所有的各種序列的雙鏈DNA分子結合。在游離狀態(tài)下，SYBRGreenI發(fā)出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結合，嵌入至dsDNA，熒...

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如何選擇合適的細胞凋亡試劑盒

細胞調(diào)亡是細胞主動死亡的過程，并出現(xiàn)一系列特征變化。包括核固縮、核碎裂、凋亡小體形成，以及DNA特征性片段化、新的基因表達和特定的生物大分子合成等。流式細胞儀可以對不同細胞凋亡的過程進行定性和定量檢測，通過檢測細胞膜完整性來反應細胞凋亡是常用的流式檢測細胞凋亡常用方法之一。其原理是：①用AnnexinV檢測早期凋亡細胞：AnnexinV可以結合細胞膜上的磷酯酰絲氨酸，磷酯酰絲氨酸位于正常細胞膜內(nèi)側，不會被檢測到，凋亡時外翻到細胞膜外表面，可以被檢測到。②用PI或者7AAD檢測...

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CCK-8法進行細胞毒性檢測的方法

CCK-8法進行細胞毒性檢測的方法CCK-8法是細胞活力和細胞毒性檢測常用的一種檢測方法，其具體操作方法如下：1.制備細胞懸液：選取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞制作細胞懸液，并計數(shù)。2.在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。3.將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃，5%CO2）12-24小時，使細胞達到指數(shù)期（培養(yǎng)時間根據(jù)細胞種類的不同和每孔內(nèi)細胞數(shù)量的多少而異）。4.吸出各孔培養(yǎng)基，向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測藥物進行干預。（實驗組加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)基，空白...

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CCK-8細胞活性檢測實驗步驟

CCK-8細胞活性檢測實驗步驟CCK-8實驗可用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測。使用酶標儀在450nm波長處測OD值，可間接性反應活細胞的數(shù)量。使用CCK-8試劑盒進行細胞活性檢測是一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。CCK-8細胞活性檢測實驗步驟：一、實驗前準備：酒精燈、移液槍、酶標儀（帶有450nm濾光片）、96孔培養(yǎng)板、CO2培養(yǎng)箱、CCK-8、細胞計數(shù)板、PBS等。二、繪制曲線1....

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CHO細胞外泌體的分離和表征

CHO細胞外泌體的分離和表征CHO細胞是一種廣泛用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術從分批培養(yǎng)中分離和富集細胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡，這些分析包括動態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。一、細胞培養(yǎng)1.培養(yǎng)基與細胞細胞可使用CHO系中的CHO-S細胞。培養(yǎng)基使用CD-CHO培養(yǎng)基（ThermoFisher）。在培養(yǎng)基中添加8mM...

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